Tripsin

Tripsin nedir?

Tripsin (CAS 9002-07-7), sığır veya domuz pankreasından elde edilen bir serin proteaz enzimidir. Parenzyme, Tryptar ve Trypure ticari isimleriyle de bilinir.

Tripsin nerede kullanılır?

• Gıda, ilaç ve biyoteknoloji üretiminde kontrollü protein hidrolizi için endüstriyel standart enzim
• Gıda işleme: soya, peynir altı suyu ve et proteinlerinden hidrolizat ve peptit fraksiyonu üretimi; hedef moleküler ağırlık dağılımlarına ulaşılır
• Peynir altı suyu proteininin hidrolizinde kullanılır; elde edilen hidrolizat, kas onarımı ve toparlanma için amino asit biyoyararlanımını artırır
• Bebek maması ve tıbbi beslenme: hipoalerjenik protein fraksiyonları
• Biyoteknoloji laboratuvarı: hücre kültüründe adhere hücrelerin yüzeyden ayrılması; uygulamada çözeltiye eklenen EDTA, kalsiyum ve magnezyumu bağlayarak hücre-hücre adezyonunu zayıflatır ve enzimin hedef peptit bağlarına erişimini kolaylaştırır
• Biyofarmasötik alanda başlıca uygulama alanı insülin üretimi olmuş, ardından diğer hücre kültürü alanlarında da kullanılmıştır
• İlaç üretimi: peptit sentezi ve enzim replasman terapisi araştırmalarında hammadde
• Proteomik: protein dizileme öncesi triptik sindirim protokollerinde spesifik kesim noktaları

Formülasyon notları

• En yüksek etkinlik pH 7-9 aralığında ve 37 °C sıcaklıkta gözlenir
• PMSF ve TLCK gibi serin proteaz inhibitörleri ile EDTA gibi metal iyonu şelatlayıcıları enzim etkinliğini baskılar
• USP, NF, BAEE ve 1:250 gibi farklı etkinlik birimleri farklı ölçüm yöntemlerine dayanır ve birbirine otomatik olarak eşdeğer kabul edilmemelidir
• Rekombinant olmayan tripsinde kimotripsin sınırı 2500 birim tripsin başına en fazla 50 birimdir; rekombinant tripsinde ise mirosinaz ve diğer safsızlık enzimleri bulunmaz
• Rekombinant olmayan tripsinin spesifik etkinliği ≥2500 USP birim/mg protein, rekombinant tripsinin spesifik etkinliği ≥3800 USP birim/mg proteindir
• Saflaştırılmış tripsinin özgüllüğü, kimotripsini etkisizleştiren TPCK işlemiyle artırılır
• Dizileme kalitesinde modifiye tripsin ve Trypsin Gold, indirgeyici metilasyonla modifiye edilir; bu işlem otolitik sindirime dirençli, yüksek etkinlikte ve kararlı bir molekül verir

Tipik spesifikasyon

• Domuz tripsini 1:250, gama ışınlarıyla sterilize edilmiş formda piyasada bulunur
• Ağız yoluyla kullanım için mide yıkımından korunması gereken proteolitik bir enzim olduğundan enterik kaplı veya geciktirilmiş salımlı formlar gereklidir
• Tripsin tozu yalnız ürün adına göre değil, enzim etkinliğine göre satın alınmalı ve değerlendirilmelidir

Mevzuat

• Tripsinin ATC kodları B06AA07, D03BA01 ve M09AB52'dir
• Rekombinant tripsin, rekombinant E. coli veya maya sistemleriyle ifade edilir ve dış kaynaklı viral bulaşmadan arındırılmıştır
• Tripsin I, hem Amerika Birleşik Devletleri Farmakopesi (USP) hem de Avrupa Farmakopesi (EP) gerekliliklerini karşılar
• Tripsinin tamamı Amerika Birleşik Devletleri veya Kanada kaynaklıdır ve sığır süngerimsi ensefalopatisi (BSE) riski taşımadığı kabul edilir

Saklama, ambalaj ve elleçleme

• Tripsin tozu kapalı, kuru ve ışıktan korunmuş halde, parti sertifikası veya ürün etiketi farklı bir talimat vermedikçe tipik olarak 2-8 °C'de saklanır
• Tripsin -15 ile -20 °C arasında saklanmalıdır